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猪乙脑抗体ELISA检测试剂盒
使用说明书
【产品名称】
通用名：猪乙脑抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Porcine Japanese Encephalitis Virus （ELISA）
【包装规格】 96T×2/盒
【预期用途】 猪乙型脑炎又名日本乙型脑炎是由猪乙 脑（Porcine Japanese Encephalitis Virus，JEV）引起的一种蚊媒性、急性人畜共患传染病，病猪主要表现为妊娠母猪流产、产死胎，公猪睾丸肿。
本试剂用于检测猪血清中猪乙 脑抗体。
【原 理】
本试剂盒系由预包被猪乙型脑炎重组E2蛋白的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测猪血清、血浆样本中猪乙型脑炎抗体。实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本，经温育后若样品中含有猪乙型脑炎抗体，则将与酶标板上抗原结合，经洗涤除去未结合的其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有猪乙型脑炎抗体。
【试剂盒组成】
|
序号 |
名称 |
规格（96T×2） |
|
1. |
酶标板 |
96T×2 |
|
2. |
酶标记物 (红盖) |
11ml×2 |
|
3. |
样品稀释液 (黄盖) |
50ml×1 |
|
4. |
20X浓缩洗涤液 |
40ml×1 |
|
5. |
底物液A (白盖) |
11ml×1 |
|
6. |
底物液B (黑盖) |
11ml×1 |
|
7. |
终止液 (黄盖) |
11ml×1 |
|
8. |
阳性对照 (红盖) |
1.5 ml×1 |
|
9. |
阴性对照 (绿盖) |
1.5 ml×1 |
|
10. |
盖板膜 |
2张 |
|
11. |
自封袋 |
1个 |
|
12. |
说明书 |
1份 |
|
13. |
稀释板 |
2块 |
【储存及有效期】 于2～8℃避光保存，有效期为12个月。
包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为2个月。
【适用仪器】 含450nm、630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。
【样品准备】
1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。
2.用样品稀释液将待检血清按40倍稀释（如5μl血清加入195μl样品稀释液中，混匀）。阴、阳性对照不用稀释。
3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释成工作洗涤液。
【检验方法】
1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。
2.取所需用量酶标板条，设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。
3.空白对照孔加样品稀释液100μl；阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl；样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。
4.混匀，置37℃反应30分钟。
5.扣去孔内液体，每孔加350 ul工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，拍干。
6.每孔加酶标记物100μl（空白孔除外）。置37℃反应30分钟。
7.洗涤，同步骤5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，37℃避光反应10分钟。
9.每孔加终止液50μl，混匀，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A值），无参比波长用空白孔调零(即所有孔吸光值减去空白孔吸光值)。
【参考值】 实验正常的情况下，阴性对照≤0.10，阳性对照≥0.6。
【检验结果的解释】
1.样品A值≥0.38为阳性；样品A值在0.2到0.38之间为可疑；样品A值＜0.2为阴性。
2.本实验结果为阴性或可疑时表明猪只抗体水平不足。
【试验方法的局限性】
该试验仅作为定性检测猪血清、血浆中猪乙型脑炎抗体，根据A值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估。
【注意事项】
1.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。
2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。
3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。
4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以完全溶解。
5.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。
6.用于检测的样品应保持新鲜。
7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。
8.不同批号试剂组分不得混用。
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