种属：

HL7702[L02]肝正常细胞传代即去除原培养基并将细胞从原培养体系转移到新鲜的生长培养基中，该过程可使细胞系或细胞株进一步增殖。

接种后培养细胞的生长将从延滞期进入对数期，即：细胞呈指数增殖。当贴壁培养的细胞已占据所有可用基质、没有扩增空间，或者悬浮培养的细胞已超过培养基所能支撑的能力，无法进一步生长时，细胞增殖速度将大大降低甚至完全停止  。为了将细胞密度维持在*水平，以便细胞继续生长，并且刺激其进一步增殖，必须培养物分成若干部分，并添加新鲜培养基。

HL7702[L02]肝正常细胞淋巴母细胞样细胞呈球形，通常悬浮生长，不贴附在基质表面。

HL7702[L02]肝正常细胞细胞培养实验室

无菌工作区域：

细胞培养实验室的主要要求是需要维持细胞培养工作区域处于无菌状态。尽管*设置独立的组织培养室，在较大的实验室内划出的细胞培养区域同样可用于无菌操作、孵育以及细胞培养物、试剂和培养基的储存。获得无菌条件的最为简单、经济的方式就是使用细胞培养通风橱  (即：生物安全柜)。

细胞培养通风橱：

细胞培养通风橱可提供无菌工作环境，同时限制多种微生物学操作产生的感染性泼溅或气体挥发。目前已经开发出 I 级、II 级和 III 级三种细胞培养通风橱，以适应不同的研究和临床需要。

细胞培养通风橱的分类

I  级细胞培养通风橱配合良好的微生物学技术，可为实验室工作人员和环境提供相当水平的防护，但是此类通风橱无法防止培养物污染，其在设计和空气流动性上均与化学通风橱类似。

II 级细胞培养通风橱用于涉及 BSL-1、2 和 3 级物质的工作，同样可为细胞培养实验提供必需的无菌环境。II 级生物安全柜适用于操作可能具有危害的物质  (例如：来源于灵长类动物的培养物、被病毒感染的培养物、放射性同位素、致癌性或毒性试剂)。

III  级生物安全柜为气密性设备，可为工作人员和环境提供能够达到的*等级的防护。

III  级生物安全柜适用于涉及已知人类致病原及其他  BSL-4  级物质的工作。

细胞培养通风橱的气流性质细胞培养通风橱通过维持工作区域上方稳定、单向的  HEPA 过滤空气流动，保护工作环境免受灰尘及其他空气污染物污染。气流可以呈水平方向，与工作台面平行吹过，或者也可呈垂直方向，从通风橱上方吹向工作台面。

根据设计的不同，水平流通风橱可为培养物  (即：空气吹向使用者)  或者使用者  (即：空气由通风橱内的负压经前方吸入)  提供保护。而垂直流通风橱则可同时为使用者和培养的细胞提供良好的保护。

超净工作台水平层流或垂直横流"超净工作台"不属于生物安全柜；该设备可将  HEPA 过滤空气由工作台后方经工作台面吹向使用者，导致使用者可能接触到有潜在危害的物质。此设备只能为产品提供保护。超净工作台可用于某些洁净操作，例如：无菌或电子设备的无尘组装，不得用于操作细胞培养物质或药物配方以及可能具有的物质。

有关生物安全柜的选择、安装和使用的更多信息，请参阅《微生物和生物医学实验室生物安全》第五版

HL7702[L02]肝正常细胞无菌技术核对表

以下核对表简要列出了一些建议和方法，指导您切实使用无菌技术。

工作区域

细胞培养通风橱设置是否正确？

细胞培养通风橱所在区域有无气流和直接出入通道？

工作台面是否整洁？是否仅仅放置了实验所需的物品？

开始工作前用 70% 乙醇擦拭工作台面了吗？

是否定期对培养箱、冰箱、冰柜及其他实验室设备进行清洁和消毒？

个人卫生

您洗手了吗？

您穿戴个人防护设备了吗？

如果您留了长发，您把头发扎在后面了吗？

您是用移液器操作液体吗？

试剂和培养基

您采用适当的方法对实验室中配制的所有试剂、培养基和溶液进行灭菌了吗？

在将容器、培养瓶、培养板和培养皿放入工作台面之前，您用 70% 乙醇擦拭其外部了吗？

试剂瓶、培养瓶及其他容器不使用时盖紧了吗？

是否已将所有培养板均放入无菌重复密封袋中？

是否有试剂外观浑浊？是否被污染了？试剂中有漂浮颗粒吗？有难闻气味吗？有颜色异常吗？如果出现上述情况，是否已对其进行去污并丢弃？

操作

您操作时是否缓慢、谨慎、注意无菌技术了？

在将移液器、试剂瓶和培养瓶放入细胞培养通风橱之前，用 70% 乙醇擦拭其表面了吗？

是否将盖子口朝下放置在工作区域？

您是使用无菌玻璃吸管或者一次性无菌塑料吸管操作液体吗？

无菌吸管是否仅仅使用一次以免交叉污染？

您是否注意到避免使吸管*触碰到任何非灭菌物品包括瓶口螺纹的外缘？

发生液体泼溅时是否立即吸干并用 70% 乙醇擦拭该区域？

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