H.A.;羊膜细胞说明书产品简介：

来源ATCC，DSMZ,Sciencell

无支原体病毒检测通过

病毒

病毒是一种微观感染性物质，利用宿主细胞结构进行复制。病毒体积极小，因而要检测培养物中有无病毒以及将其从细胞培养实验室所用试剂中去除都十分困难。由于大多数病毒对宿主有非常严格的要求，因此一般不会对与其宿主物种不同的细胞培养物造成不良影响。但是，使用病毒感染的细胞培养物时却会对实验室工作人员造成严重的健康威胁，特别是当实验室培养的是人或灵长类动物细胞时。通过电子显微镜检查、一组抗体的免疫染色、ELISA  实验或者采用适当病毒引物的 PCR 技术可以检测出细胞培养物的病毒污染。

支原体

支原体是一种没有细胞壁的简单细菌，被认为是能够自我复制的最小的生物。由于体积极小(一般小于 1 微米)，支原体的检测十分困难，除非其达到极高的密度，导致细胞培养物变质，在此之前往往没有明显的感染征象。有些的支原体可能会在培养物中持续存在，而不会导致细胞死亡，但是这些支原体会改变培养体系中宿主细胞的行为和代谢。慢性的可能表现包括：细胞增殖速度降低、饱和密度下降以及悬浮培养物凝集；但是，*切实有效的检测支原体污染的方法就是采用荧光染色  (例如：Hoechst 33258)、ELISA、PCR、免疫染色、放射自显影或者微生物学测定技术定期检测培养物。

H.A.;羊膜细胞说明书成纤维细胞  (或者成纤维细胞样细胞)  为双极或多极细胞，呈细长形，贴附在基质上生长。

H.A.;羊膜细胞说明书无菌技术

细胞培养的成功很大程度上取决于保护细胞免受细菌、真菌和病毒等微生物的污染。非无菌物品、培养基和试剂、带有微生物的空气颗粒、不干净的培养箱和污染的工作台面均是导致微生物污染的来源。

无菌技术的作用是在环境微生物与无菌的细胞培养物之间形成一道屏障，它通过一套操作流程来降低培养物被上述污染源污染的可能。无菌技术的组成要素包括：无菌工作区域、良好的个人卫生、无菌试剂和培养基以及无菌操作。

无菌工作区域

最为简单、经济的减少空气颗粒和气体挥发  (例如：灰尘、芽孢、皮屑、喷嚏)  污染的方法就是采用细胞培养通风橱。

(1)细胞培养通风橱应正确设置，放置于专门用于细胞培养的区域，同时要避免来自门、窗及其他设备的气流，不能有直接的来往通道。

(2)工作台面应保持整洁，只放置特定实验所需的物品；不能用作储存区域。

(3)使用前后均应彻底消毒工作台面，周围区域和设备应定期清洁。

(4)常规清洁时，工作前和工作过程中，特别是发生泼溅后，应使用 70% 乙醇擦拭工作台面。

(5)使用完毕后，可用紫外灯对细胞培养通风橱内空气和暴露在外的工作台面进行消毒。

(6)在细胞培养通风橱内不需要也不建议使用煤气灯火焰。

(7)细胞培养通风橱应始终保持运转，长时间不使用时方可关闭。

H.A.;羊膜细胞说明书的典型生长模式图。此半对数图显示了细胞密度与培养时间之间的关系。培养的细胞通常按照标准生长模式增殖。细胞接种后第一个生长阶段是延滞期，此阶段细胞，处于适应培养环境、为快速生长做准备的状态。延滞期之后是对数期，此阶段细胞呈指数增殖，消耗生长培养基中的营养素。当所有生长培养基均被耗尽 (即：一种或多种营养素耗竭) 或者细胞已占据所有可用基质时，细胞即进入静止期 (即：平台期)，其增殖速度大大降低甚至完全停止。

H.A.;羊膜细胞说明书下列建议仅为实验室安全规范的指导原则，不应将其视为完整的工作准则。请咨询您所 在机构的安全委员会，遵守当地有关实验室安全的规章制度。

有关微生物学标准规范的更多信息以及具体生物安全等级指导原则，请参阅《微生物和 生物医学实验室生物安全》第五版

(1)必须始终穿戴适当的个人防护设备。手套污染时应更换，将用过的手套与其他污染的

实验室废物一起处置。

(2)操作可能具有危害的物质后以及离开实验室前应洗手。

(3)在实验室内不得进食、饮水、吸烟、处理隐形眼镜、涂抹化妆品或者存放供人食用的食物。

(4)遵守所在机构关于锐器(即：针头、手术刀、吸管和破裂的玻璃器皿)安全操作的准则。

(5)小心操作，尽量避免形成气体挥发和/或泼溅。

(6)实验开始前、结束后以及可能具有的物质发生泼溅时，应立即使用适当的去污剂对所有工作台面进行去污。无论实验室设备是否被污染，均应定期进行清洁。

(7)在对可能具有的物质进行处置前应先去除污染。

(8)发生事故可能导致感染性物质暴露时，应向相应人员  (例如：实验室主管、安全员) 报告。

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